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4种非洲猪瘟核酸检测试剂盒性能比较分析

来源:郑州天顺食品添加剂有限公司 发布时间:2021-09-12 11:03:51 关注: 0 次
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目地:为养猪厂试验室给予合理的非州猪瘟病毒核苷酸诊断试剂盒挑选计划方案。方式:挑选4种非洲猪瘟核苷酸诊断试剂盒,根据比照梯度方向稀释液后国家标准物质的线形增加、对低成分时(20copies/μL)的敏感度、对以纯净水为样版时阳性诊断率。結果:线形增加实验中,A检测试剂盒对20copies/μL浓度值的标准物质检验率是100%(3/3),别的检测试剂盒对该浓度值下的标准物质,均未做到100%;低成分敏感度实验中,A检测试剂盒呈阳性诊断率为91.67%(44/48),别的生产厂家检测试剂盒的诊断率各自为85.42%(41/48)、79.17%(38/48)、58.33%(28/48);阳性实验中,A和B未发生阳性反应,而C、D检测试剂盒各自发生2、1个非特异性反映。结果:历经特性较为,A检测试剂盒更合乎养猪厂试验室针对高敏感度和低阳性的规定。

非州猪瘟病毒(AfricanSwinefevervirus,ASFV)是一类历史悠久的病毒感染,早在1921年在非州澳大利亚初次发觉,迄今大约100年的历史时间。非洲猪瘟(Africanswinefever,ASF)就是由非州猪瘟病毒造成的野猪、山猪的一种亚急性、性热、高宽比接触动物传染病,全部种类和年纪的猪均可感柒,患病率和致死率高,可以达到100%。世界动物国际卫生组织将其列入法律规定汇报小动物病疫,我国也将其列入一类小动物病疫。ASF最开始于1921年在非州澳大利亚被发觉,1957年传到欧洲地区,1971年传到亚得里亚海地域和非洲地区,2007年传到高加索地区,现仍在非州、南撒丁岛和高加索地区时兴,给各国的养殖行业产生了极大财产损失。2018年8月3日,我国诊断第一例非洲猪瘟疫情,以后持续扩散,2020年4月19日,海南省报导非洲猪瘟疫情后,在我国国内31个省区,已所有发觉非洲猪瘟疫情。

现阶段还没有高效的预苗对非洲猪瘟开展防治,全国各地养殖厂需依靠微生物安全防范措施,并建立迅速确诊试验室,应用高精确的检查方式 ,对进进出养猪厂化学物质开展检测。该科学研究致力于根据对比不一样生产厂家的非洲猪瘟核苷酸诊断试剂盒的关键特性,为养猪厂试验室给予合理的检测试剂盒挑选计划方案,协助养猪厂有效挑选检测试剂盒,构建牢固的微生物检测服务防御,狙击非洲猪瘟的侵入。

1原材料与方式

1.1检测试剂盒与国家标准物质

4种商业化的非州猪瘟病毒即时莹光PCR诊断试剂盒,A生产厂家检测试剂盒(非预混型)批号342020005,B生产厂家检测试剂盒(非预混型)批号202006,C生产厂家检测试剂盒(预混型)批号20191118,D生产厂家检测试剂盒(预混型)批号20200301;B646L遗传基因标准物质GBW(E)091034(生产批号:2020001)购自我国牧工商集团公司有限责任公司。

1.2实验仪器

即时荧光定量PCR仪SLAN-48P购自上海市宏石医疗电子有限责任公司。

1.3实验方式

1.3.1线形增加实验

将B646L遗传基因标准物质稀释液至1000copies/μL、100copies/μL、20copies/μL、4copies/μL、0.8copies/μL,共5个稀释液度,应用4种检测试剂盒,依照其使用说明配备PCR管理体系,开展莹光PCR检验,每一个稀释液度反复3次,与此同时设定阴阳性对照。剖析各检测试剂盒对不一样梯度方向抗体检测Ct值,较为不一样检测试剂盒对各稀释液度的诊断率和变异系数。

1.3.2敏感度实验

将B646L遗传基因标准物质稀释液至20copies/μL,应用4种检测试剂盒对稀释液后的标准物质开展莹光PCR扩增,每一种检测试剂盒反复检验48个孔,统计分析该拷贝数下不一样检测试剂盒的诊断率。

1.3.3阳性检验实验

应用纯水系统做无模版阴性对照,每一种检测试剂盒配备46个阴性反应,设定阴阳性对照。统计分析不一样检测试剂盒发生阳性的频次,阳性几率最少者为宜。

2結果与剖析

2.1线形增加結果

应用4种检测试剂盒对稀释液后的标准物质开展检查时,4种检测试剂盒在1000copies/μL、100copies/μL二种拷贝数的诊断率均为100%,在拷贝数稀释液至20copies/μL时发生诊断率的差别:A检测试剂盒的患病率为100%(3/3),B实验试剂:诊断率为33.33%(1/3),C检测试剂盒的患病率为33.33%(1/3),D检测试剂盒的患病率为66.67%(2/3)。A检测试剂盒在20copies/μL的诊断率高过别的检测试剂盒,实际結果见表1与表2。

2.2敏感度实验結果

应用4种检测试剂盒对稀释液至20copies/μL的标准物质开展检验,数据显示A检测试剂盒的诊断率最大为91.67%(44/48),B检测试剂盒的诊断率其次为85.42%(41/48),C检测试剂盒的患病率为79.17%(38/48),D检测试剂盒的患病率为58.33%(28/48),实际結果见图1与表3。

2.3阳性检验实验結果

应用纯净水做无模版呈阴性,每一种检测试剂盒配备46个阴性反应,设定阴阳性对照,统计分析不一样检测试剂盒发生阳性(有Ct值且曲线图不典型性)的频次,A检测试剂盒未检到呈阳性,B检测试剂盒未监测到呈阳性,C试剂盒检测两个非特异性阳性反应,D试剂盒检测到一个非特异性阳性反应,实际結果见图2与表4。

3探讨

该科学研究较为了4个厂家生产的非洲猪瘟核苷酸诊断试剂盒对B646L遗传基因标准物质的检验結果,数据显示:线形增加实验中,A检测试剂盒对20copies/μL浓度值的标准物质诊断率为100%(3/3),别的检测试剂盒对该浓度值下的标准物质的诊断率均未做到100%;敏感度实验中,A检测试剂盒对稀释液至20copies/μL的4八个反复,诊断率为91.67%(44/48),别的检测试剂盒的诊断率各自为85.42%(41/48)、79.17%(38/48)、58.33%(28/48);阳性实验中,A检测试剂盒和B检测试剂盒,未发生阳性反应,C、D检测试剂盒各自发生2、一个特异阳性反应。综合性3个实验的結果,A检测试剂盒在不一样稀释液浓度值下的诊断率、较低浓度的(20copies/μL)的诊断率、阳性发生次数上领跑别的检测试剂盒,更合乎养猪厂试验室针对高敏感度和低阳性的要求,能够运用于养猪厂试验室非洲猪瘟病毒的核酸确诊。

非州猪瘟病毒对腐坏、溫度、干躁及消毒液都有着极强的抵抗能力。在合适的蛋白自然环境下,非州猪瘟病毒可在很大的温度范围和pH范畴内生存,在血夜、尿、粪中十分平稳,能长期生存于经生产加工过的生猪肉产品中。因为ASFV在自然环境中平稳、生存时间长,院内感染是防治该病原体的唯一计划方案,进到养猪厂的化学物质和员工需要开展实行严苛的院内感染消洗,并开展抗体检测。挑选一款敏感度高、阳性少的检测试剂盒,能极大提高养猪厂院内感染坚固水平。

检测试剂盒的敏感度较低,很有可能与引物设计和探头编码序列、检测试剂盒生产工艺流程有关。在医学检验流程中,诊断率稍低除与检测试剂盒敏感度相关外,还很有可能与样版复杂性、样版收集运送、样版核酸提取等多种要素有关;试验室发生阳性,很有可能与检测试剂盒不稳定、试验室环境污染、机器设备的阀值线设置等领域有关,养猪厂试验室必须 结合各领域的要素开展分辨,该探讨中C、D检测试剂盒为预混放,造成的阳性很有可能与实验试剂预混后,产生非特异性反映相关。

该科学研究仅对4个生产厂家实验试剂某一批号的检验工作能力干了简略较为剖析,样本数比较有限,并无法意味着各实验试剂的总体检验特性,仅当做一种检测试剂盒核对计划方案,供养猪厂试验室参照,试验室检验工作能力除与检测试剂盒有关特性有关外,还必须 试验室的使用工作人员严苛遵循规范操作步骤,实行严苛的质量管理,防止因实际操作缘故引发的假阴性和阳性結果。

申明:文中常用照片、文本来源于《猪业科学》,著作权归原作全部。

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