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柚皮苷二氢查尔酮的抗氧化活性研究(一)

来源:郑州天顺食品添加剂有限公司 发布时间:2021-09-12 10:42:21 关注: 0 次
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1963年,俞福惠等发觉二氢查尔酮以及化合物可做为甜味素,并从柑桔黄烷酮中获取了柚皮苷二氢查尔酮(NariNgiNDC)等。二氢查尔酮的清甜味延迟时间长,口味清新,糖度高,发热量低,安全性无毒性,能合理的屏蔽掉苦涩味。二氢查尔酮类物质对糖尿病患者有一定功效。除此之外,二氢查尔酮类物质具备药力官能团-2,6-二甲基苯乙酮构造,该官能团有清除自由基功效,根据清除氯丁二烯、消除羟氧自由基来完成。皇甫文凯以柚皮渣为原材料,超音波协助获取柚皮苷,并且用D101大孔树脂分离出来聚集,获得含量为83.7%的柚皮苷;对柚皮苷在偏碱情况下充压并以钯碳做为金属催化剂生成柚皮苷二氢查尔酮(NariNgiNDC),产出率为85.2%。参考文献和以超音波輔助酒精获取香柚皮中的柚皮苷,并且用弱旋光性AB-8环氧树脂分离纯化柚皮苷,NaOH做为过柱剂,获得含量为77.26%的柚皮苷碱溶液,最终将该烧碱溶液在金属催化剂雷尼镍的效果下,加氢裂化生成NariNgiNDC。李晚谊等研究表明云南省甜茶很强的皮肤过敏功效,其抗敏功能的成分是二氢查尔酮-4’-β-D葡萄糖水苷和二氢查尔酮-2’-β-D葡萄糖水苷。方旭兵等研究表明龙血树醇提取液龙血竭的主要成分——龙血素A跟龙血素B均为二氢查尔酮类物质,经对有关二氢查尔酮生成和装饰及其用HepG2体细胞开展抗晚期肝癌恶性肿瘤活力挑选,发觉二氢查尔酮类物质中F-18和F-16抗晚期肝癌恶性肿瘤活力不错。杨美琪研究表明运用硅橡胶、大孔树脂、MCi-CHP20P及聚糖疑胶柱等分离出来方式,融合薄层色谱及HPLC剖析木枣枣根醇提物,获得成分较高的二氢查尔酮-4’-β-D-吡喃葡萄糖水苷等16个化学物质。现阶段,NariNgiNDC的活力科学研究报导较少,本分析对其抗氧化性活力和美白皮肤活力开展基本讨论。

1原材料与方式

1.1原材料、实验试剂与机器设备

柚皮苷标准物质,上海源叶;NariNgiNDC标准物质,上海源叶;新橙皮苷二氢查尔酮标准物质,上海源叶;ABTs,碧云天生物;酪氨酸酶,上海源叶;其他实验试剂均为分析纯;AuTodoCkviNa1.1.2,英国sCripps研究室。EL204-iC电子分析天平,英国METTLERTOLEDO企业;5ML移液器,英国EppeNdorF企业;syNergyTX多用途酶标仪,英国伯腾仪器设备有限责任公司;MuLTiskaNGo全光波长读值仪,英国TherMosCieNTiFiC企业。

1.2实验方式

1.2.1ABTs氧自由基消除工作能力测量

根据3.0Mg/ML柚皮苷、1.0Mg/MLNariNgiNDC、0.30Mg/MLNHDC、0.0025Mg/ML原儿茶醛与ABTs自由基反应,测量其吸光度值,制作TroLox(0.15,0.30,0.60,0.90,1.20,1.50MMoL/L)标曲,测算其与TroLox的同样消除工作能力时的使用量。实际操作流程:

1)在96孔板的每一个检验孔内添加200μLABTs切削液。

2)空白试验孔内添加10μL纯净水或PBs等适度水溶液,标曲检验孔壁添加10μL各种各样含量的TroLox标液,试品检验孔壁添加10μL试品,轻轻地搅拌。

3)室内温度孵育2~6MiN,于光波长734NM处测量OD值。

4)依据标曲测算试品的总抗氧化能力,用TroLox等效电路抗氧化能力(TroLoxEquivaLeNTANTioxidaNCapaCiLy,TEAC)来表明。

1.2.2羟氧自由基消除工作能力测量

根据3.0Mg/ML柚皮苷、1.0Mg/MLNariNgiNDC、0.50Mg/MLNHDC、0.15Mg/ML原儿茶醛与羟自由基反应,测量其吸光度值,制作TroLox(0.01,0.025,0.05,0.10,0.15Mg/L)标曲,测算其与TroLox的剂量,从而较为抗氧化能力强、弱。

依照表1列出次序向酶标板中添加相匹配实验试剂,按表1要求的标准实际操作,以TroLox为标准物质制作标曲。

试品的抗氧化能力依据式(1)开展测算。抗氧化能力值以TroLox同样抗氧化能力时的使用量(μMoLTroLox摩尔质量/g)表明,即1g试品等同于TroLox的μMoL数。

式中,A试品—试品OD值;A空缺—试品空缺OD值;ATroLox—TroLox水溶液OD值;MTroLox—TroLox水溶液的摩尔质量(μMoL);M试品—试品的品质(Mg)。

FerriC-TPTZ切削液[300MMoL/L醋酸盐缓冲溶液(0.31g三水合乙酸钠 1.6ML醋酸 超纯水系统至100ML,pH3.6]、10MMoL/LTPTZ的40MMoL/盐酸溶液和20MMoL/LFeCL3·6H2O水溶液,以容积比10∶1∶1混和),室内温度反映30MiN后,于光波长593NM处用酶标仪测量其OD值。吸光度值的尺寸与试品的抗氧化能力正相关。维他命C的标曲配置含量为:25,50,100,200,400,800μMoL/L,测量結果以维他命C为参照规范,結果表明为μMoLAAE/g体力劳动。平行测定3次,結果取均值测算。

1.2.4 ORAC测定方法试品的自由基消除工作能力

根据3.00g/L柚皮苷、1.00g/LNariNgiNDC、3.00g/LNHDC、0.0125Mg/ML原儿茶醛与过氧化物自由基反应,测量其吸光度值,制作TroLox(62.5,125,250,500,500,1000MoL/L)标曲,测算其与TroLox的摩尔质量,较为抗氧化能力强、弱。

该办法以甲酰胺类物质AAPH做为过自由基来源于,荧光素钠盐为莹光显色剂。将荧光素钠盐、AAPH和水溶维他命C类似物TroLox各自用磷酸缓冲溶液(pH7.0)融解,在96孔板中先后添加25μL各含量的TroLox标准物质水溶液和试品及其200μL莹光光素醋酸盐水溶液(8.68NMoL/L),随后,将填料放进荧光酶标仪中,用GeNe5程序编程实际操作,37℃加热30MiN,快速添加AAPH水溶液25μL(153MMoL/L),全自动震荡混匀,在激起光波长485NM,发送光波长528NM处用荧光酶标仪测量。原始吸光度抗压强度值记作f0,之后每过1MiN测量一个点,共测量120MiN,莹光抗压强度各自记作f0,f1,f2…f120,依据公式计算(2)统计分析各含量的曲线图下总面积AUC值。ORAC的成分越高,抗氧化能力越强。

TroLox标曲配置浓度值分別为62.5,125,250,500,1000μMoL/L,测量結果以TroLox为参照规范,結果表明为μMoLTroLox(TE)/g体力劳动。平行测定3次,結果取均值测算。

1.2.5 NariNgiNDC和人铜锌超氧化物歧化酶sOD的分子对接

选用CheMBioDrawULTra14.0绘制化学物质原儿茶醛和NariNgiNDC的构造,随后用CheMBio3DULTra14.0转换为三维构造,并且用sybyL手机软件的MMFF94引力场开展提升。人铜锌超氧化物歧化酶sOD的三维构造(PDBiD:3RE0)从RCsB蛋白质数据库下载。铜锌超氧化物歧化酶和化学物质均应用AuTodoCkTooLs1.5.6转换为PDBQT文件格式。选用AuTodoCkviNa1.1.2开展分子对接。铜锌超氧化物歧化酶活力结构域的座标设定为:size_x=15,size_y=15,size_z=15;CeNTer_x=1.346,CeNTer_y=-3.077,CeNTer_z=30.419。为了更好地提升测算的精确度,将主要参数exhausTiveNess设定为20。除开尤其表明,其他参数均选用初始值。最终,选择打得分最大的构像用PyMoL1.7.6开展結果剖析。1.2.6酪氨酸酶活力抑止实验根据熊果素(0.625,1.25,2.5,5,10Mg/ML)、柚皮苷(0.625,1.25,2.5,5,10Mg/ML)、NariNgiNDC(0.625,1.25,2.5,5,10Mg/ML)、NHDC(0.625,1.25,2.5,5,10Mg/ML)与酪氨酸酶反映测量其吸光度值并制作曲线图,算出iC50值,从而较为抗氧化能力强、弱。

申明:文中常用照片、文本来源于《中国食品学报》,著作权归原作全部。

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