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农药残留的酶活性抑制与免疫分析技术的免疫分析法(六)

来源:郑州天顺食品添加剂有限公司 发布时间:2021-09-12 10:12:27 关注: 0 次
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④放射免疫剖析

放射免疫剖析(radioimmunoassay,RIA)是由Yalow R·S·和Berson S.A.于1954年建立的。该法运用放射性物质放射性核素(常见3H、125I、32P等)标识抗原体或抗原,根据检验放射性物质抗压强度对抗原体或抗原开展示踪剂和检验,具备检验敏感度高(检出限达ng至pg乃至fg级)、非特异强、简单好用的优势。但放射性物质同位素标记要在特别的试验室中开展,标识较艰难,标识和剖析中容易导致公害病。除此之外,因为放射性物质原素有一定药物半衰期,易自主衰减系数且无法储存,检验时需用特别的实验仪器,在农残剖析中的使用遭受非常大限定,乃至趋于淘汰。

2、酶免疫力剖析

酶免疫力分析方法(erzyme immunoassay,EIA)是Engrall等于1966建立的。该法用特殊的酶(如乳酸脱氢酶、偏碱磷酸酯酶等)来标识抗原体或抗原,运用抗原和抗体反映的非特异和酶催化反应显色反应的精确性对抗原和抗体反映开展示踪剂和检验。常见酶免疫力剖析包含酶抑止法(erlzynle inhibition,EI)、酶变大免疫测定法(enzyme—multipledimmlmoassay techniqtle,EMIT)和酶联免疫吸咐测定方法(ELISA)。

(1)酶抑止法:此方法运用相应的酶标识抗原体或抗原,酶标识物在产生抗原和抗体一氧化氮合酶时,酶促反应减少,根据测量酶促反应的变动对抗原和抗体反映开展检验。酶抑止法是一种均相免疫力统计分析方法,方式简单,既能够用以检验抗原,还可以用来检验抗原体,但其敏感度较低。

(2)酶变大免疫测定法:此方法将酶标识化肥半抗原、被测化肥及抗原添加反映管开展市场竞争融合反映,离心式除去结合物,上清液中多余的酶标化肥半抗原量与被测化肥成分呈正比例。

在上清液中添加酶的底物和铬黑T,酶促显色反应抗压强度与被测化肥成分呈正比例。酶变大免疫测定法无需固相媒介,可重复性好,检验速度更快。

(3)酶联免疫吸咐测定方法:酶联免疫吸咐测定方法是将抗原和抗体的非特异反映与酶对底物的高效率催化反应紧密结合的一种敏感度很高的非均相免疫力剖析技术性。将抗原体或抗原固定不动于固相(如聚乙烯微孔表层),抗原和抗体反映均衡后,清洗去除不必要的分散物,融合在固相上的酶标识物催化反应底物反映使铬黑T着色,根据测量酶促着色抗压强度对抗原和抗体反映开展检验。在具体运用中,检验生物大分子抗原体多采取双抗原夹心巧克力等非市场竞争方式。检验化肥、药品等小分子水选用间接性市场竞争酶联免疫吸咐测定方法、包被抗原立即市场竞争酶联免疫吸咐测定方法和被子抗原立即市场竞争酶联免疫吸咐测定方法。

现阶段已创建了多种多样内吸性、氨基甲酸酯类、拟除虫菊酯类等药剂的酶联免疫吸咐测定方法,有一些已开发设计成商业化免疫力诊断试剂盒。酶联免疫吸咐测定方法是当前使用较多的农残免疫力剖析技术性。

3、莹光免疫力剖析

莹光免疫力剖析(fluorescerlce immurtoassa3r,FIA)包含莹光标识免疫力剖析和酶标识莹光免疫力剖析。莹光标识免疫力剖析是用相应的莹光化学物质标识抗原体或抗原,运用抗原和抗体反映的非特异和莹光检验的高敏感度对抗原和抗体反映开展示踪剂和检验。經典的莹光免疫力剖析以有机化学莹光分子结构为标识物,常见的有异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocya-nate,FITC)、四羟基异硫氰酸罗丹明(tetramethyl rh(Marnine isothic)cyanate,TRITC)等。酶标识莹光免疫力剖析是在酶标识免疫力剖析选用莹光底物替代生色底物,是现在非放射免疫剖析中敏感度较高的办法之一。

莹光免疫力剖析具备精确度高、易标识、好储存等优势。可是大部分有机化学莹光化学物质的荧光寿命短,在具体运用中因为试品、实验试剂的本身莹光和激起光的散射等要素,造成 环境莹光高,危害了测量的稳定性和敏感度。

(1)非市场竞争方式:莹光免疫力分析方法检验抗原、颗粒物性或生物大分子抗原体一般选用非均相反映和非市场竞争方法,检验办法和基本原理如下所示。

①立即法:先固定不动待测物(含抗原体或抗原的试品),添加莹光标识抗原(或莹光标识抗原体),开展免疫反应。清洗除去分散物后开展莹光检验。如固相上融合了莹光标识抗原(或莹光标识抗原体),说明固相上面有相对的非特异抗原体或特异性抗体存有,且莹光抗压强度与对应抗原体或相对应抗原的量在一定区域内呈正比例。

②双抗原夹心巧克力法检验抗原体:先固定不动抗原,添加待测物开展反映。清洗除去分散物后添加莹光标识的第二抗原。清洗除去分散物后开展莹光检验。如固相上融合了莹光标识物,说明有相对的非特异抗原体存有,且莹光抗压强度与被测抗原体量在一定区域内呈正比例。

(2)市场竞争方式:化肥等小分子水化学物质的莹光免疫力剖析一般选用市场竞争方式,检验办法和基本原理如下所示。

①莹光光的偏振免疫力剖析:莹光光的偏振免疫力剖析(fluorescence polarization immulaoassay,FPIA)是一种运用化学物质分子结构在水溶液中转动速度分子质量尺寸呈反比例的特性检验总体目标剖析物的方式 。以合理的莹光化学物质标识化肥半抗原,当莹光标识物遭受一个平面图偏振光直射时,假如分子结构的短轴与付出的偏振光面平行面,消化吸收的偏振光数最多,分子结构被激起。当高自旋分子结构返回激发态时,发送一个偏振光。莹光标识物在水溶液中转动速率越快,发送的偏振光越弱。因为分子结构转动的速度分子质量尺寸呈反比例,因此偏振光变弱的水平与分子结构转动的速率呈正比例。当莹光标识化肥与相对应抗原融合后,分子质量明显增大,转动速率显著缓减,偏振光提高。当待测水溶液中有总体目标剖析化肥存有时,总体目标剖析化肥与莹光标识化肥市场竞争融合抗原,使莹光标识化肥与抗原的融合降低,偏振光变弱,变弱的水平与被测化肥的含量在一定区域内呈正比例。

②以莹光提高和莹光猝灭为基本的免疫力剖析:该法运用抗原和抗体反映历程中莹光标识物或莹光底物产生莹光提高或莹光猝灭功效来检验抗原体或抗原。

莹光光的偏振免疫力剖析、以莹光提高和莹光猝灭为基本的免疫力剖析一般是均相免疫力剖析,方式简单迅速、经济发展安全性,但环境的影响限定了方式的敏感度。

③時间辨别萤光免疫力剖析:時间辨别萤光免疫力剖析(tlmeresolution fluorescencc、immunoassav,TRFIA)以镧系元素螯合物为莹光标识物或莹光底物,运用标识的TRFIA物或底物的荧光寿命较长的特性,在环境莹光消退后测量标识物或底物的莹光抗压强度,可合理减少环境莹光的影响,明显提升 莹光免疫力研究的敏感度,是二十世纪八十年代免疫力研究的一个关键提升。

4、电化学发光免疫力剖析

电化学发光是运用化学变化历程中形成的可以激起电化学发光剂(常见鲁米诺以及化合物)发亮。电化学发光免疫力剖析(chemilumirlescence lmmunoassay,CLIA)是把电化学发光的高灵敏与免疫力研究的高可选择性融合在一起的少量免疫力剖析技术性,包含电化学发光标识免疫力剖析、酶标识电化学发光免疫力剖析(底物发亮免疫力剖析)等。

(1)电化学发光标识免疫力剖析:电化学发光标识免疫力研究的机理和反映方式与放射免疫剖析基本一致,仅仅用电化学发光剂替代同位素标记抗原体或抗原。电化学发光剂标识的抗原体或抗原与被测抗原或被测抗原体反映后经分离出来、清洗等流程,最终根据测量亮度单位来明确待测物的成分。

(2)酶标识电化学发光免疫力剖析:酶标识电化学发光免疫力研究的机理和反映方式与酶联免疫吸咐测定方法基本一致,仅仅用电化学发光剂替代铬黑T,以检验电化学发光替代色度测量。

电化学发光免疫力研究的检验敏感度能够与放射免疫剖析匹敌,方式简单迅速。现阶段,电化学发光免疫力剖析出现的首要情况是被测试品中别的成分的环境影响大,危害定量分析测量效果的精确度。

参考文献:农残剖析,

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