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农药残留的酶活性抑制与免疫分析技术的免疫分析法(一)

来源:郑州天顺食品添加剂有限公司 发布时间:2021-09-12 10:12:22 关注: 0 次
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一、免疫力剖析基本

免疫力剖析(immunoassay,LA)是一种以抗原和抗体非特异鉴别与可逆性融合反映为基本的对总体目标剖析物开展定性研究和定性分析的技术性。

与基本物理化学剖析对比,免疫力剖析具备可选择性好、敏感度高、剖析容积大、简单便捷、低成本、可以信赖等优势,可大大简化乃至省掉试品前处理方式,可检验旋光性强、难蒸发、具备同分异构体的化肥,不用珍贵仪器设备,对应用员工的专业性技术标准不高,非常容易推广和营销推广。根据免疫化学科研开发的免疫测定检测试剂盒和检测卡,可使用于很多当场试品的快速检测。

二十世纪90年代至今,化肥、饲料等小分子水化学物质免疫力剖析新技术的分析和开发进展快速,在粮食作物、新鲜水果、蔬菜水果、荼叶、纯蜂蜜、肉、蛋、奶等农副食品和水、土壤层等自然环境试品中化肥、饲料残余物迅速监管层面起到了关键功效。全球粮食作物与农牧业机构(FAO)向很多我国强烈推荐免疫力剖析技术性,美国化学会将免疫力剖析、色谱(包含气象色谱仪和高效率液相色谱仪)一同列入农残剖析的首要技术性,免疫测定結果也被纳入具备效力的直接证据,变成二十世纪中后期至今科学研究开发设计和运用的热门之一。

(一)抗原体

抗原体(antigen,Ag)是一类能诱发人体免疫系统产生体液免疫,能够与体液免疫物质(抗原或效用体细胞)产生非特异融合的化学物质。抗原性强的化学物质大部分是构造较繁杂、分子质量大、具备脏东西性(抗原体与所刺激性的人体本身化学物质的差异)的化学物质。病源微生物菌种、机构、体细胞、异源蛋白等多具有以上特性,因此全是较好的抗原体。抗原体具备抗原性和反映原性二种特性。抗原性就是指抗原刺激人体后,诱发人体免疫系统产生体液免疫,造成对应抗原或效用体细胞的特异性免疫反映性。反映原性就是指抗原体与体液免疫物质抗原产生非特异融合的免疫反应性。

1、抗原体的种类抗原体依据起着的功能分成彻底抗原体和半抗原,依据来源于和配制方式又可分成纯天然抗原体和人力抗原体,依据其与机身的亲缘关系可分成相同自体抗原体和本身抗原体等。

(1)彻底抗:原彻底抗原体(COF~@ete antigen)通称抗原体,是一类不仅有抗原性,又有反映原性的化学物质。大部分蛋白、体细胞、病毒感染、病菌等全是彻底抗原体。

(2)半抗原:半抗原(hapten)就是指具备反映原性,但无抗原性的化学物质,又称之为不彻底抗原体。半抗原分成繁杂半抗原和简易半抗原。繁杂半抗原(如大部分构造比较比较复杂的有机物等)不具备抗原性,但具备反映原性。简易半抗原(如链烷等)既不具备抗原性,又不具备反映原性。

(3)纯天然抗原体:纯天然抗原体就是指来源于纯天然微生物(如小动物、绿色植物、微生物菌种等)的抗原体,这类抗原体包含体细胞、机构、蛋白、核苷酸、杂含糖量、病菌、病毒感染等。纯天然抗原体一般全是较好的彻底抗原体。

(4)人力抗原体:人力抗原体包含历经人力化学修饰或更新改造的纯天然抗原体、全生成人力抗原体和以生物大分子为媒介的人力抗原体。为了更好地科学研究抗原性的化学基础,可以用已经知道有机化学官能团换置繁杂纯天然抗原体表层的特殊官能团获得人力化学修饰或更新改造的纯天然抗原体,如2,4-二硝基苯(DNP)装饰蛋白质、碘化蛋白质等。全生成抗原体多见高分子材料高聚物,如由碳水化合物汇聚成的活性多肽等。相对性分子质量低于2 500的小分子水一般不具有抗原性,但可将小分子水化学物质与适度生物大分子的媒介(如蛋白)共价键耦联制取人力抗原体,免疫力小动物得到对相对应小分子水化学物质具备非特异鉴别功能的抗原。

(5)相同自体抗原体:相同自体抗原体(alloantigen)就是指存有于人、相同小动物不一样个人(同卵双生者以外)的抗原性化学物质。当某个人的体细胞或机构进到另一个体时,可造成体液免疫。人们血浆中的血细胞血形抗原体和白细胞计数抗原体均属该类。

(6)本身抗原体:本身抗原体(autoantigen)就是指造成本身体液免疫的自己机构成份。一般本身机构对人体沒有抗原性,但在创伤、感柒、电磁波辐射、药品等干扰下,本身机构能够产生转性变成本身抗原体,刺激性人体造成免疫反应。本身抗原体分成隐敝的本身抗原体和装饰的本身抗原体。

2、危害抗原性的要素

(1)脏东西性:抗原体的有机化学构成和结构特征差别越大、微生物的属种和亲缘关系越长,则抗原性越强。如鸡卵清蛋白对禽畜是弱免疫原,而对羊、兔等小动物则是强免疫原。

(2)分子大小:抗原体分子质量越大其抗原性越强。相对性分子质量超过105的蛋白质含量是极强的免疫原,相对性分子质量低于105的化学物质一般是弱免疫原。Young和Atassi(1986)的研究结果显示,抗原性规定的最少活性多肽分子结构是由6个之上DNP磷酸氢钙构成的寡聚肽。在纯天然活性多肽中,现阶段已经知道可以造成体液免疫的最少分子结构是相对性分子质量为3 480的升血糖值素。

(3)有机化学构成与构造:除分子质量外,抗原体的抗原性还在于其有机化学构成和构造(包含有机化学官能团和构像)。构造越繁杂的抗原体,其抗原性越强。例如杂含糖量具备抗原性,而甲基纤维素、糖元、长链乙烷等尽管分子质量大,但化学结构非常简单,则不具有抗原性。有一些抗原体对酶、光、热、氧、化学药品等因素比较敏感,有机化学构成和构造(包含立体式构造)易产生变化,其抗原性也非常容易发生改变,蛋白质水解后抗原性会大幅度降低。

(4)物理学情况:颗粒物抗原体(如病毒感染等)比溶解度抗原体的抗原性强,球形蛋白质比条状蛋白质抗原性强。

3、化肥人力抗原体:化肥、药品等小分子水化学物质一般不具备抗原性,但很多化肥、药品具备反映原性。Landsteiner(1917)在小分子水化学物质免疫力剖析层面开展了开拓性科学研究工作中,他将羟基苯磺酸重氮化后与蛋白的色氨酸残基酚羟基邻位融合,制取人力彻底抗原体,用该人力抗原体免疫力小动物,得到了抗羟基苯磺酸抗原,在这个基础上确立了羟基苯磺酸的免疫力统计分析方法。将总体目标剖析化肥以半抗原的方式与分子质量大的蛋白共价键耦联制取人力抗原体,使化肥分子结构突显于蛋白表层做为抗原决定簇,以人力抗原体免疫力小动物,诱发人体免疫系统产生体液免疫,造成抗总体目标剖析化肥的特异性抗体,在这个基础上创建对该化肥具非特异鉴别功能的免疫力统计分析方法。

实际上,并不是全部化肥半抗原与媒介蛋白共价键耦联后免疫力小动物,都能形成抗相对应化肥的特异性抗体。如对酶、光、热、氧、化学药品等因素比较敏感的化肥,在生成半抗原、制取人力抗原体、免疫力小动物制取抗原的全过程中容易产生构造转变 ,难以获得对这种化肥具非特异感染力的抗原。抗原和抗体反映一般在水看中开展,共价键和静电引力是维持抗原和抗体感染力的关键相互作用力之一。构造简易的网状结构乙烷,疏水性强,即便 其分子质量大,与载体蛋白共价键耦联后免疫力小动物,也难以获得抗网状结构乙烷的抗原。很多具备旋光性官能团、构造较比较复杂的化肥(如替代杂环化合物、替代芬芳环类化肥,乃至是含三元环的拟除虫菊酯)半抗原共价键融合在蛋白表层,变成特殊的抗原决定簇,非常容易激话小动物的人体免疫系统,造成对相对应化肥具非特异感染力的抗原。而一些构造简易、分子质量小的化肥(如甲胺磷),虽有一些免疫化学科学研究报导,但迄今并未真真正正得到对甲胺磷具非特异感染力、可以对甲胺磷开展高灵敏检验的应用性抗原。

(二)抗原

抗原(antihody)是人体免疫系统受抗原刺激后形成的能与抗原体、半抗原产生非特异融合的血蛋白。人免疫球蛋白(immu:nogl()bulin,Ig)一般是一组具备抗原活力和抗原样构造的蛋白。人免疫球蛋白普遍现象于哺乳动物(包含人)的血夜、机构和外分必物中。全部抗原全是人免疫球蛋白,但并不是全部人免疫球蛋白全是抗原,如骨髓瘤蛋白质的结构特征与抗原类似但无病毒学活力,具备免疫力活力的人免疫球蛋白才可以称之为抗原。

参考文献:农残剖析,

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