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乳酸乳球菌胞外多糖提取纯化工艺研究(二)

来源:郑州天顺食品添加剂有限公司 发布时间:2021-09-12 09:49:02 关注: 0 次
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(3)除蛋白中离心式時间的提升

本实验操作中发酵物体细胞分离出来后,添加50%的三氯乙酸水溶液1/5容积,在16000×g的向心力下各自离心式10min、20min、30min、40min,选择最优控制离心式時间,如图4所显示。离心式的時间选择30~40min为最好。

3、酒精沉积含糖量标准的提升

(1)酒精沉积含糖量中乙醇浓度的提升

本实验操作中发酵物体细胞分离出来后,添加50%的三氯乙酸水溶液1/5容积,在16000×g的向心力下各自离心式40min,添加3倍容积浓度值分別为70%、80%、95%、100%的乙醇溶液,4℃标准下醇沉12h。分析,测量胞外含糖量的生产量,如图所示5所显示。含糖量的获取量伴随着乙醇浓度的提高而持续扩大。一些小分子水的含糖量分子结构在较低浓度的酒精下不容易沉积,仅有当乙醇浓度充足高时,才产生沉积。因而当乙醇浓度为100%时,做到最高值,即酒精沉积含糖量的最佳浓度值为100%。

(2)酒精沉积含糖量中酒精容积的提升

蛋白沉淀后各自依照1∶1、1∶2、1∶3、1∶4的料醇比添加含量为100%的酒精水溶液,测量胞外含糖量的生产量,如图所示6所显示。提升酒精加上容积能够提升 胞外含糖量的得到量,沉积中含糖量获取率随酒精加上倍率的提高而上升,可是当酒精加上倍率在3~4倍时,EPS成分明显增强,且都做到较浓度较高的,因此从获取成本费考虑到,最好的酒精加上倍率为3倍。

(3)酒精沉积含糖量中沉积時间的提升

酒精沉积含糖量中在4℃标准下各自醇沉12h、24h、36h,测量胞外含糖量的生产量,如图所示7所显示。醇沉時间与胞外含糖量成分的相互关系不显著。而试验操作过程中,添加酒精后直接造成沉积,而且伴随着醇沉時间的提升,沉淀色调持续加重。为了更好地确保粗多糖的纯净度,醇沉時间选12h最合适。

4、正交试验剖析

各自选择危害EPS成分很大的获取标准,三氯乙酸浓度值、向心力和离心式時间开展三要素三水准正交试验,結果如表1。结果显示,危害EPS成分的各要素次序关联为B>C>A,向心力对含糖量获取的干扰很大,离心式時间其次,三氯乙酸浓度值对含糖量获取的危害最少。依据正交试验結果,得到最佳发醇标准组成为A3B2C3,即60%的三氯乙酸浓度值、在14000×g的向心力下离心式40min。研究表明,向心力和离心式時间的提升能够提升 蛋白质的摆脱率,但会降低最后EPS成分,减少含糖量纯化得率,因而,在14000×g向心力下离心式40min最好,EPS成分可做到392.50mg/L。

三、结果

本工程以挑选出的胞外含糖量增产菌乳酸菌乳革兰阴性杆菌乳亚种LL9为菌苗,开展EPS获取提纯加工工艺标准科学研究。应用三氯乙酸法沉积蛋白,根据合理操纵三氯乙酸的剂量来减少对EPS构造的毁坏。根据单要素试验及正交试验最后认证,发觉当用含量为60%三氯乙酸解决过发酵物后,在14000×g向心力下离心式40min除蛋白质实际效果最好;沉积含糖量的最佳组成是3倍容积、浓度值为100%的酒精沉积12h。最优控制分离纯化加工工艺标准为:加上三氯乙酸60%(w/v)(12h)→500r/min拌和5min→离心式沉积除蛋白质(4℃,14000×g,40min)→上清加酒精沉积含糖量(100%,3倍容积,4℃,解决12h)→离心式(12000×g,30min)→低温干燥→沉积温开水融解(稀释液10倍)→分析MD34(4℃,解决12h)。经试验认证生产流程有效并行得通。EPS成分最终做到392.50mg/L,生产量为原先的1.49倍。为以后进一步提纯和深入分析乳酸菌饮料产胞外含糖量的构造和生物活性等出示参照。

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