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运用超高效液相色谱-生物化学检测在线联用分析方法筛选中药中的丁酰胆碱酯酶抑制剂(一)

来源:郑州天顺食品添加剂有限公司 发布时间:2021-09-12 09:42:13 关注: 0 次
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目地:创建超高效液相色谱色谱仪(UPLC)-微生物化学检测(BCD)线上联用技术性迅速挑选中药材中的丁酰乙酰胆碱酯脂酶(BChE)缓聚剂的方式 。方式:应用UPLC-DAD-BCD方式迅速挑选吴茱萸、钩藤、玄参、山豆根(苗)提取液中的BChE缓聚剂。以莲芯碱为阳性对照,调查UPLC-DAD-BCD方式用以BChE缓聚剂挑选的可行性分析。应用超高效液相色谱-线形正离子阱/电场路轨阱高分辨质谱(UHPLC-LTQ/Orbitrap MS)方式评定4种中药材的70%工业甲醇提取液中的关键活力成份。結果:UPLC-DAD-BCD方式迅速挑选出12个BChE缓聚剂,在其中吴茱萸4个、钩藤3个、玄参五个、山豆根(苗)两个,山豆根(苗)中的两个活力成份与玄参一共有,根据UHPLC-LTQ/Orbitrap MS评定出这其中的八个BChE缓聚剂,各自为去氢吴茱萸碱、吴茱萸碱、吴茱萸次碱、1-羟基-2–4(1H)-喹诺酮、去氢毛钩藤碱、毛钩藤碱、苦参碱和氧化苦参碱。结果:创建的UPLC-DAD-BCD线上统计分析方法敏感度高、再现性好,能迅速挑选中药材中的BChE缓聚剂,为中药材中澳的生物活性成份的迅速挑选给予了一种高效率、方便快捷的研究对策。

老年性痴呆病( Alzheimer’s disease,AD)是以渐行性的记忆力缺失和认知功能障碍为临床医学特点的神经系统退行性疾病。现阶段,AD的准确发病机制并未充分表明。AD 的病发与演变历程中,胆碱能系统软件损伤甚至胆碱( ACh)的降低与认知功能降低立即有关,因而,碱性磷酸酶缓聚剂常见于AD临床医学病人的医治。

现阶段,用以医学的碱性磷酸酶缓聚剂多见AChE缓聚剂,颈静脉不良反应很大,长期性治疗效果不理想化。研究表明,在人体内中有2种胆碱核糖核苷酸,即胆碱脂酶(acetylcholinesterase,AChE)和丁酰碱性磷酸酶(butyrylcholinesterase,BChE),正常人人的大脑中具体由AChE新陈代谢胆碱,BChE的成分非常少,而AD病人脑中的状况刚好反过来,AChE活力降低而BChE活力上升。科学研究表明,BChE缓聚剂不但可以提升 胆碱水准,改进大白鼠记忆力,且难得少有或沒有AChE造成的颈静脉胆碱能不良反应。故与AChE对比,BChE可能是一个更适合的AD医治靶标,并在AD 中有着关键功效。早已发售用来医治AD的药品大部分全是黄酮类成份,吴茱萸、钩藤、玄参和山豆根(苗)上都含有黄酮,可以用BChE缓聚剂的挑选。

近些年,学者专注于从天然药物化学中找寻副作用小的碱性磷酸酶缓聚剂,已看到的一些活力成份有黄酮类、黄酮类化合物、多糖类、香豆素和萜类等,在其中以黄酮为主导。从绿色植物中挑选可选择性强、副作用小的碱性磷酸酶缓聚剂已变成药业行业分析的网络热点。为了更好地迅速挑选繁杂机质中的活性物质,各种各样线上统计分析方法早已被创建并被运用,如:HPLC-UV-DPPH用以生地黄中的抗氧剂的挑选和活力点评,HPLC-UV-AChE方式可快速检测银杏提取物于中的AChE缓聚剂,HPLC-BCD方式用以检验绿茶叶中的α-葡萄糖苷酶缓聚剂等。

本分析以莲芯碱为阳性对照品,提升仪器设备联用系统软件,创建线上UPLC-DAD-BCD统计分析方法,迅速挑选中药材中BChE缓聚剂,为中药材中活性物质的迅速挑选给予一种高效率、方便快捷的研究对策。

1 原材料

1.1 仪器设备

超高效率液相色谱UPLC(PDA探测器,英国Waters企业);Ultimate 3000 UHPLC(英国Thermo Fisher企业);Thermo Scientific LTQ-Orbitrap Elite组合型高分辨质谱仪(英国Thermo Fisher企业);柱后衍化仪(PCX)(英国Pickering Laboratcries企业);Milli-Q 超纯水系统净化设备(英国Millipore公司);Metter Toledo AL204电子分析天平(上海市速展计量仪器有限责任公司);台式一体机快速冷藏型少量离心脱水机(大龙兴创实验室仪器有限责任公司);WD-94158型超声波清洗器(昆山市美美哒超声波仪器设备有限责任公司)。

1.2 中药材与实验试剂

吴茱萸(贵州省,生产批号1907051)、钩藤(广西省,生产批号18120081)、玄参(江苏省,生产批号B2101009)和山豆根(苗)(广西省,生产批号181201)中药材中药饮片购于湖南长沙老百姓大药房,经湖北药品监督检测研究所丁晓萍研究者评定分成芸香科绿色植物吴茱萸Euodia rutaecarpa (Juss.) Benth的干躁果子、茜草科绿色植物钩藤Uncaria rhynchophylla (Miq.) Miq. ex Havil.的干躁带钩茎枝、豆类植物玄参Sophora flavescens Ait.的干躁根和豆类植物越南地区槐Sophora tonkinensis Gagnep.的干躁根和地下茎。

乙腈、工业甲醇为色谱纯(英国,J.T.Baker);5,5'-二硫代双(2-氟苯苯甲醛) (DTNB) (英国Sigam,生产批号 SHBG2823V )、碘化硫代丁酰乙酰胆碱(BTCI)(英国Sigam企业,生产批号BCBT4812);BChE(英国Sigam企业,生产批号SLBP0912V);牛血清蛋白(英国Sigam企业,生产批号 SLBL2616V);超纯水系统(Milli-Q超纯水系统提纯系统软件自做);工业甲醇、三羟基羟基甲烷气体(Tris)等实验试剂均为分析纯(国药控股化学药品有限责任公司)。莲芯碱(我国食品药品安全评定研究所,生产批号111696-201703)。

2 方式

2.1 试品溶剂的制取

各自高精密称量吴茱萸、钩藤、玄参、山豆根(苗)粉末状4 g,于具塞锥形瓶中,高精密添加25 mL 70%工业甲醇,称取净重,超声波(输出功率350 W,頻率35 kHz)30 min,再称取净重,用70%工业甲醇补充损害的净重,混匀过虑,取续渗沥液,用0.22 μm微孔滤膜滤过,预留。

高精密称量莲芯碱高氯酸盐,用色谱仪工业甲醇制取成含量为0.06,0.12,0.24,0.36,0.60,1.20和1.80 mg·mL-1的水溶液,立即气相。

2.2 BChE水溶液和栽培基质水溶液的制取

用0.1 moL·L-1 0.1%牛血清蛋白的Tris-HCl缓冲溶液(pH 8.0)制取0.3 U·mL-1的BChE水溶液;高精密称量DTNB粉末状适当,用Tris-HCl缓冲溶液(0.1 moL·L-1、pH 8.0)制取成1.5×10-3 moL·L-1的水溶液;高精密称量BTCI粉末状适当,用Tris-HCl缓冲溶液(0.1 moL·L-1、pH 8.0)制取成3×10-3 moL·L-1的水溶液。

申明:文中常用照片、文本来源于《中国医院药学杂志》,著作权归原作全部。

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