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羧甲基川木瓜多糖的制备及对α-葡萄糖苷酶的抑制作用(一)

来源:郑州天顺食品添加剂有限公司 发布时间:2021-09-12 09:32:27 关注: 0 次
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糖尿病患者为一种以血糖高为基本特征的代谢病,近些年患病率持续增长。甘酶缓聚剂被称作治疗糖尿病的第四类药,能够 减缓单糖消化吸收,减少饭后血糖高,使甘精胰岛素的代谢获得改进。现阶段葡萄糖苷酶缓聚剂的由来具体有3种方式:有机合成、植物提取物、生物发酵。绿色植物來源的葡萄糖苷酶缓聚剂,具备医治功效柔和长久、不良反应小、可长久应用等特性。

现阶段从绿色植物中获取获得的葡萄糖苷酶缓聚剂首要有:黄酮类、黄酮、萜类、酚类化合物、含糖量等。研究发现,多种多样植物多糖有抑止α-葡萄糖苷酶的功效,但一部分纯天然含糖量的活力与已用以医学的甘酶缓聚剂有一定的差别。化学修饰是改进活力的重要途径之一,根据对含糖量残基上的甲基、羧基、羟基等官能团开展装饰,很有可能会提高活力或造成新的活力。
川番木瓜为被子植物门番木瓜属绿色植物贴梗海棠的成熟期果子。广西百色市凌云县有充足的川番木瓜資源,其花可作有不错的观赏性,果子就可以服用又可药用价值,有“百益的果”的美誉。川番木瓜作服用,带有碳水化合物、矿物、维他命等;作药用价值,有清理血管垃圾、降血糖、降血压、提升 人体免疫力和养肝降酶等作用。

现阶段世界各国对川番木瓜的活力的分析主要是聚集在有机物、三萜和黄酮类化合物上,对川番木瓜含糖量的分析相比较少。研究组研究发现,川番木瓜含糖量具备抑止α-葡萄糖苷酶的功效,川番木瓜含糖量开展羧甲基化装饰能够提高对α-葡萄糖苷酶的抑制效果。不一样标准下羧基甲化的产品对α-葡萄糖苷酶的抑制效果有很大的差别。本实验先提升羧甲基化反映的技术标准,再检测不一样取代度的羧甲基含糖量抑酶促反应,致力于获得具备不错抑酶促反应的羧甲基化川番木瓜含糖量。

一、原材料与方式

1、原材料、实验试剂与仪器设备

原材料:川番木瓜购于广西百色市凌云县,切成片、晾晒、破碎筛粉预留。

实验试剂:蛋白酶k4-氟苯酚-2-D-吡喃葡萄糖水苷(PNPG);α-葡萄糖苷酶;阿卡波糖;酒精、氯乙酸、等保、氢氧化钠溶液等其他实验试剂均为分析纯。

分析纯。仪器设备:E-201-C型pH复合型电级;CPA64型电子分析天平;UV-1750紫外线由此可见光度计;640一IR傅利叶转换光谱分析仪;SMARllAB3Kwx-透射仪;RE-52AA型旋转蒸发器;HitachiSU8220透射电镜;m-lA-50真空泵冷冻式干燥机;HHS-21-4电加热式恒温水浴锅。

2、方式

(1)川番木瓜含糖量的提炼及提纯生产流程

川番木瓜粉末状→乙醚流回脱油→85%酒精流回去除黑色素、低聚木糖等小分子水→旋蒸→烘干处理沉淀→添加纯净水萃取法2次→缓解压力浓缩含糖量萃取液→酒精沉积→离心分离机得粗多糖→蛋白酶k脱蛋白质→Sevag法脱蛋白质→活性碳脱黑色素→含糖量液浓缩→酒精沉积→离心分离机→低温干燥→得特制含糖量。

(2)羧甲基川番木瓜含糖量的制取

①单要素实验

选用氢氧化钠溶液-氯乙酸法制取羧甲基川番木瓜含糖量。称量0.50g特制川番木瓜含糖量于三口瓶中,添加50mL等保,在常温状态拌和20min,迟缓添加一定含量的NaOH水溶液10mL,再次拌和40min,将一定品质氯乙酸添加反映系统中,提温至一定溫度水浴反映一段时间,反映结束后,制冷至室内温度,用稀硫酸调pH至中性化,装人透析袋中,用纯净水分析48h,缓解压力浓缩含糖量水溶液,用3倍90%酒精沉积含糖量,离心分离机,低温干燥,得羧甲基川番木瓜含糖量,取小量试品测取代度。以NaOH使用量、氯乙酸使用量、反映溫度、反应速度为单要素,科学研究各要素对取代度的危害。

②正交实验

依据单要素实验結果,选择NaOH使用量、氯乙酸使用量、反映溫度、反应速度为调查要素,以羧甲基川番木瓜含糖量的取代度为制取指标值,开展L9(34)正交实验,提升羧甲基川番木瓜含糖量的配制加工工艺,正交实验要素水准设定见表1。

(3)取代度测量

羧甲基川番木瓜含糖量的取代度参考参考文献开展测量。精准称量0.05g羧甲基川木含糖量,溶解规范盐酸溶液中,置磁力搅拌器中拌和融解,用规范氢氧化钠溶液水溶液滴定管,各自记录下来pH为2.1和4.3时耗费的NaOH水溶液容积V1、V2,取代度按住式测算。

式中:DS为取代度;

m为羧甲基川木含糖量的品质;

c为规范氢氧化钠溶液溶液的浓度。

(4)红外线定量分析

取小量干躁的川番木瓜含糖量、羧甲基川番木瓜含糖量试品与溴化钾粉末状混和碾磨后压片糖果,用光谱分析仪在4000~400cm-1范畴内扫描仪。

(5)透射电镜外貌剖析

取小量干躁的川番木瓜含糖量与羧甲基川番木瓜含糖量试品放试品台子上,置正离子磁控溅射仪中镀导电性金膜,在5kV髙压下各自观查不一样变大倍率下的表层构造。

(6)X透射剖析

取小量干躁的川番木瓜含糖量、羧甲基川番木瓜含糖量试品在X-放射线透射仪上精确测量X-放射线的抗压强度,扫描仪视角为5~90,扫描仪速率为70/min。

(7)不一样取代度羧甲基川番木瓜含糖量对α-葡萄糖苷酶的抑制效果

各自选择低、中、高3种取代度的羧甲基川番木瓜含糖量测量抑止α-葡萄糖水营酶的活性,以PNPG为底物,用酶活性测定检测抑制效果。在具塞比色管中试管婴儿中添加2mLpH为6.8聚磷酸盐缓冲液,0.2mL0.1U/mL的。α-葡萄糖苷酶,羧甲基川番木瓜含糖量水溶液lmL,搅拌后置摄像头37℃水浴15min,再添加20mmol/LPNPG0.3mL运行反映,在37℃再次反映20min,添加2mL0.1mol/LNa2C03停止反映,测量400nm处OD值值。每一个试品反复3次,取均值,按住式测算抑止除率。

抑制率%=[Ao-(A1—A2)]/Ao×100

式中:Ao为磷酸缓冲液替代含糖量水溶液的OD值;

A1为添加含糖量水溶液后的OD值;

A2为磷酸缓冲液替代PNPG的OD值。

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