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转谷氨酰胺酶催化的糖基化修饰对黑豆蛋白抗氧化活性的影响(一)

来源:郑州天顺食品添加剂有限公司 发布时间:2021-09-12 09:01:20 关注: 0 次
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大黑豆因其种皮呈灰黑色而而出名,营养丰富,具备高蛋白食物、低脂肪的特点,其富含营养元素、维他命和黄豆皂角苷等各种作用因素,除此之外,大黑豆还具备美容护肤、抗癌功效;几丁聚糖是一种玻璃化温度在2~20中间的低聚糖,具备相对分子质量低、吸咐效果非常的好,水溶好、易被身体消化吸收、生物活性高,调整肠道微生态、改进肠胃机构特征和增强免疫作用等特性;蛋白的糖基化装饰,是以化学键联接的形式将吸水性的糖原化学物质导进蛋白质分子当中,使其不仅有蛋白的分子结构特点,又有糖原成分的亲水性特点;研究表明,蛋白糖基化装饰后呈现出优异的乳状液工作能力,其溶解度、胶凝性、流变学特点、抗氧化、耐热性、抑菌性等功能性性能也逐步提高。蛋白糖基化装饰后抗氧化的分析较少;文中运用糖基化装饰技术性,以几丁聚糖和大黑豆蛋白质为研究对象,制取几丁聚糖糖基化大黑豆蛋白质,讨论其耐热性能的转变,为扩展糖基化蛋白质改性材料和给予纯天然的抗氧剂给予基本上技术性根据。

一、原材料与方式

1、原材料和实验试剂

大黑豆,黑龙江省房地产青仁黑豆。DPPH(分析纯),英国Sigam企业;ABTS(AR级),英国Sigam企业;水溶维生素E(Trolox),英国Sigam企业;几丁聚糖,浙江省金壳医药有限责任公司;三氯化铁(FeCl3)(分析纯),天津市金汇太亚化学药品有限责任公司;铁氰化钾(K3Fe(CN)4)(分析纯),天津市收复生物化工研究所;三氯乙酸(分析纯),天津大茂化学药品厂,磷酸三钠(Na3PO4)(分析纯),天津长鑫宏翔经贸有限责任公司;钼酸铵(分析纯),天津科密欧化学药品有限责任公司;亚硝酸钠(分析纯),天津鸿鑫化学药品有限责任公司;对羟基苯磺氟苯(分析纯),天津市收复生物化工研究所;硫酸N-(1-萘基)-乙二胺(分析纯),天津市收复生物化工研究所。

2、实验仪器

DK-98-ⅡA电加热恒温水浴锅购白天津泰斯特仪器设备有限责任公司;紫外线由此可见光度计购自瓦里安高新科技有限责任公司;XS204电子器件电子分析天平购自上海市精学科学研究有限责任公司;漩涡混合器购自江苏省同君仪器设备高新科技有限责任公司。

3、方式

(1)水溶液配置

①DPPH切削液配备:精准称重0.0123gDPPH,酒精充足融解并滴定剂至50mL,做为DPPH切削液(0.39mM)。

②PBS缓冲溶液:称量8gNaCl、0.2gKCl、1.44gNa2HP04和0.24gKH2P04,溶解800mL纯净水中,用HCl调整溶剂的pH至7.4,最终加蒸溜水滴定剂至lL就可以。髙压蒸气杀菌20min,储存于室内温度或4℃冰柜中。

③ABTS切削液配备:精准称量0.192lgABTS标准物质融解于50mL纯净水中,做成7.0mol/L的ABTS溶液。精准称量0.3312g过硫酸钾融解于500mL纯净水中,做成2.45mmo/L过硫酸钾溶液。将50mLABTS溶液与50mL过硫酸钾溶液混和,在常温下遮光置放12h~16h,产生ABTS氧自由基贮备液。精确汲取1.0mL添加40~50mL的工业乙醇,在734nm下OD值为O.700±0.020获得ABTS切削液。

(2)大黑豆蛋白质的制取

①大黑豆分离蛋白:大黑豆蛋白质分离出来获取的方式参考本科学研究早期实验中历经调优的获取计划方案:400g大黑豆豆柏粉,放水4L,用0.5mol/LNaoH调pH至8.5,50℃水浴拌和1.5h,8000r/min离心式10min取上清液,用0.5mol/L硫酸调pH至4.5,8000r/min离心式10min取下一层固态,用pH为4.5的纯净水洗二遍,8000r/min离心式10min,取沉积,用0.5mol/LNaOH调pH至7.0,低温干燥(干躁标准:干躁架溫度-20℃,真空值0.5mbar)

②酶法糖基化大黑豆蛋白质:酶法糖基化大黑豆蛋白质的方式参考本试验早期实验中提升所得的计划方案:取1.5g大黑豆分离蛋白,加1.5g几丁聚糖,1.0g转谷氨酰胺酶和100mL纯净水,37℃水准震荡反映4h,80℃水浴灭酶5min,制冷至常温后4℃分析去除未融合的几丁聚糖,低温干燥。

③自化学交联大黑豆蛋白质:为比照不一样改性材料方式下大黑豆蛋白质的抗氧化,转谷氨酰胺酶的添加占比同②,取1.5g大黑豆分离蛋白,加1.0g转谷氨酰胺酶和100mL纯净水,37℃水准震荡反映4h,80℃水浴灭酶5min,制冷至常温后4℃分析去除未融合的几丁聚糖,低温干燥。

④寒湿法糖基化大黑豆蛋白质:为比照不一样改性材料方式下大黑豆蛋白质的抗氧化,几丁聚糖的添加占比同②,取1.5g大黑豆分离蛋白,加1.5g几丁聚糖和100mL纯净水,90℃水浴4h,取下在25℃水浴5min,4℃分析去除未融合的几丁聚糖,低温干燥。

(3)DPPH氧自由基消除工作能力测量

本实验中DPPH氧自由基消除工作能力测量在参照Sajga等的办法基本上,稍加修改。汲取1mL待测液,添加2mLDPPH切削液充足混匀,在常温下遮光30min,在517m处测量该液OD值(Ai),以工业乙醇做为空缺,与此同时测量lmL标准溶液与2mL工业乙醇的OD值(Aj)及1mL工业乙醇和2mLDPPH切削液溶液的OD值(Ac),按住式测算DPPH的清除率(SA)。

(4)ABTS随意消除工作能力测量

参考唐艳公平的方式稍作修改。汲取1.0mL待测液添加1.0mL的ABTS切削液,搅拌。在常温下遮光10min,于光波长734nm下测其OD值(Ai),工业乙醇做为空缺,与此同时测量30μL标准溶液和1.0mL工业乙醇溶液OD值(Aj)及30μL工业乙醇和1.0mL的ABTS切削液溶液OD值(Ac),按住式测算ABTS氧自由基清除率(SA)。

(5)总复原功能的测量

本实验中试品总复原功能的检测在Oyaizu等的办法基本上稍加调节。取检测试样水溶液0.5mL添加pH为6.6的聚磷酸盐缓冲液和1%的K3Fe(CN)6水溶液各2.5mL并搅拌匀称,于50℃置放20min,添加2.5mL纯净水和1.0mL0.1%的FeCl3混和匀称,静止不动10min后于700nm下测量OD值(用0.5mL的纯净水更换0.5mL试品水溶液别的标准不会改变做为调零水溶液)。

(6)总抗氧化能力的测量

本实验中总抗氧化能力的测量参考Benzuie和Strain的方式 ,略做改善。应用磷钼络离子法,又被称为钼蓝法。总抗氧化能力测量基本原理:钼酸铵会在盐酸与硫酸铵的效果下产生氧化反应,物质展现翠绿色,该成分在695nm上有较大消化吸收光波长。抗氧剂会和钼会市场竞争产生氧化反应,进而危害翠绿色物质的产生量。能够根据光度法根据测量OD值来检验钼蓝的生产量,为此间接性的体现出抗氧剂的工作能力。OD值值越高说明抗氧剂的抗氧化能力越强。在具塞试管婴儿中先后添加1.0mL(3mol/L)H2S04水溶液,1.0mL(0.14mol/L)Na3P04水溶液和1.0mL(0.2mol/L)钼酸铵水溶液,再各自添加1.0mol之上试品水溶液,纯净水滴定剂至5.0mL混匀,变道于95℃溶液中加温90min,取下散热至室内温度后在695nm光波长下测量OD值。

(7)消除亚磷酸盐工作能力的测量

本实验中亚硝酸钠消除工作能力的测量依据李佳颖等的方式 ,稍作改动。精确汲取0.5mL试品水溶液于试管婴儿中,各自添加5μg,mL亚硝酸钠水溶液250μL,震荡匀称,加pH3.0的柠檬酸钠-磷酸二氢钠缓冲溶液2.0mL,搅拌后于37℃水浴30min。添加1mL浓度值为0.4%对羟基苯磺氟苯和1mL浓度值为0.2%硫酸N-(1-萘基)-乙二胺,搅拌并滴定剂至标尺,静放15min,于545nm光波长测量其OD值Ao。同用工业乙醇替代试品别的标准不会改变,测得吸光度数值氏;lmL浓度值为0.2%硫酸N-(1-萘基)-乙二胺替换成1.0mL工业乙醇测量吸光度数值A2。按住式测算清除率(SA)。

申明:文中常用照片、文本来源于《中国食品添加剂》,著作权归原作全部。

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