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枯草芽孢杆菌中胞壁肽的分离纯化及其对芽孢的影响(二)

来源:郑州天顺食品添加剂有限公司 发布时间:2021-09-10 09:29:12 关注: 0 次
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2結果与剖析

2.1胞壁肽HPLC剖析

肽聚糖是由N-乙酰葡糖胺(GlcNAc)、N-乙酰胞壁酸(MurNAc)及肽模块构成的聚合体,肽链碳水化合物的构成主要是Ala、Glu、DAP,也有少量的Gly,大部分G-及产孢菌具备meso-DAP残基。对枯草枯草芽孢菌植物细胞的肽聚糖选用变溶菌素酶解,其精彩片段经硼氢化钠复原后,选用HPLC开展胞壁肽的分离出来,获得胞壁肽谱图(图1)。从图上能够看得出,枯草枯草芽孢菌的胞壁肽关键带有15个胞壁肽成分,关键的峰八个。肽聚糖历经变溶菌素酶解后,产生以GlcNAc-MurNAc-L-Ala-D-Glu-mesoDAP为基本上结构单元的二聚体、三聚体、四聚体等。这种胞壁肽成分分子质量越大,保存期越长,因而,单个总体目标峰出峰時间较早。Atrih等对枯草枯草芽孢菌的胞壁肽开展剖析,获得3八个成分,在20min保存期内的前4个成分均为胞壁肽单个,某些成分官能团发生氟苯化而保存期不一样。此結果也与文献资料报导相一致。
 

2.2胞壁肽ESl-MS剖析

对每一个成分单峰搜集,除盐后开展ESI-MS剖析,根据对3号峰的MS剖析(图2),其分子离子[M] 为m/z869,伴峰:[M H] 为m/z870,该分子质量构成与GlcNAc-MurNAc-L-Ala-D-Glu-mesoDAP(标准偏差:869.9)一致,伴峰的产生是由于在共价键方式下,目地精彩片段会在水解全过程里加一个氢,分子质量提升。因而,峰3即是总体目标物二糖三肽(GM-TriDAP),其结构示意图如图2所显示。

2.3胞壁肽FTlR

对胞壁肽3号峰单峰搜集,低温干燥后开展傅里叶变换红外线定量分析,红外光谱图见图3所显示,从图上能够看得出,在两个地区存有强消化吸收,一个是~3447cm-1,另一个是~1020cm-1。肽链的好多个特点带包含氟苯A带(~3500cm-1)、氟苯Ⅰ带(1600~1700cm-1)和氟苯Ⅱ带(1510~1580cm-1)。氟苯A带主要是N-H伸缩式震动,对共价键十分比较敏感;氟苯Ⅰ带是肽链的首要特点带,主要是C=O和C-N的升缩震动;而氟苯Ⅱ带主要是N-H平行面变角震动,及其C-N和C-C的升缩震动。糖环的特点峰集中化在800cm-1~1200cm-1中间,包含C-OH的升缩震动和糖苷键C-O-C的震动累加消化吸收数据信号。峰3的红外光谱分析的消化吸收峰分类见表1所显示,从表格中还可以看得出,胞壁肽3号峰包含糖肽的典型性官能团震动特点,一个是肽链的氟苯消化吸收带,包含3447cm-1的氟苯A带、1647cm-1的氟苯Ⅰ带;另一个是在1200~800cm-1,1020cm-1是糖环及其糖苷键的特点消化吸收峰。因而,胞壁肽3号峰具备典型性的糖肽结构类型。
 

2.41HNMR

氢谱是全部磁共振谱中敏感度较高的,能够为化学物质给予充足的构造信息内容。对胞壁肽3号峰的结构特征开展氢谱分析,检测其能否与GlcNAcMurNAc-L-Ala-D-Glu-mesoDAP构造相符合。氢谱中各官能团异构的有机化学特点具体表现在化学位移上,氢原子核外电子云相对密度越大,化学位移越小,出峰部位越挨近右侧。1HNMR谱见图4所显示,从图上还可以见到经典的胞壁肽数据信号方式,糖肽官能团异构自身的特性、官能团等都是对有机物的化学位移造成危害,进而更改官能团异构出峰部位,糖环和肽链主要表现不一样的化学位移。在先人对于肽聚糖精彩片段核磁共振剖析的根基上,对胞壁肽3号峰氢谱的化学位移开展所属,GlcNAc、MurNAc和肽链羟基残基的常见数据信号处于4.7×10-6~3.3×10-6中间,4.67是GlcNAc异头氧原子上的质子共震数据信号;针对羟基和环烃的甲基质子化学位移处于2.5×10-6~1.1×10-6中间。综合性以上剖析,胞壁肽峰3的1HNMR与总体目标糖肽构造相符合。

2.5胞壁肽对芽胞出芽的危害

芽胞出芽后热抵抗性消退,寒湿解决(80℃,20min)不可以立即消灭芽胞,但可将出芽的芽胞消灭。因而,热抵抗性消退常常用于表现芽胞是不是经历了出芽。为认证文中中获得的胞壁肽是不是具备出芽实际效果,将制作的胞壁肽添加到枯草枯草芽孢菌168芽胞液中混和匀称(胞壁肽终浓度值为1mg/mL),37℃震荡孵育1h。接着,将胞壁肽解决后的芽胞开展寒湿解决(80℃,20min),运用平板电脑计数法测算寒湿解决前后左右芽胞总数的转变即是出芽芽胞的总数。胞壁肽对枯草枯草芽孢菌168芽胞出芽的危害如图所示5所显示。未添加胞壁肽的解决组里,芽胞数经寒湿加工处理后并没有降低,表明芽胞仍维持原来的热抵抗性,并没有产生出芽全过程。而添加胞壁肽后的芽胞经寒湿加工处理后总数降低了0.9个多数,表明0.9个多数的芽胞在胞壁肽解决后热抵抗性消退,发生了出芽,与先人分析結果相一致。由此可见,本实验中制取的胞壁肽(二糖三肽)能诱发芽胞出芽,为事后进一步科学研究胞壁肽诱发芽胞出芽原理打下基础。
 

3结果

运用枯草枯草芽孢菌为目标,制取、分离纯化病菌营养体植物细胞上的胞壁肽,获得的胞壁肽最小单位为二糖三肽,此胞壁肽能够 有效的推动芽胞出芽,为芽胞出芽的进一步科学研究打下基础。

申明:文中常用照片、文本来源于《中国食品学报》,著作权归原作全部。

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