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氨基甲酸乙酯降解酶的固定化研究(二)

来源:郑州天顺食品添加剂有限公司 发布时间:2021-09-10 09:28:48 关注: 0 次
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1.3. 4挥发物口味成分的检验

1) 香味化学物质获取

依据顶空进样器固相微萃取原理(HS-SPME)改善的方式 [31]获取挥发物口味化学物质,并且用GC/MS开展剖析。将10mL“美乐”红酒试品和3.6gNaCl放进15mL提纯瓶中,再添加20uL20mg/L的3-辛醇标液。提纯瓶用里衬密封性,试品在45℃下均衡20min,微提纯在45℃、500r/min的混合下不断60min。提纯完毕将提纯头插进气相口解析5min。

2) 色谱仪标准

用Agilent7890B气相色谱与5977A质谱仪器开展GC-MS剖析。离子交换柱型号规格HP-Innowaxcolumn柱(60m×2.5mm×0.25μm),载气是总流量为1mL/min的氮气,气相口溫度230℃。柱温选用程序升温:原始溫度50℃保存5min,以3%/min升到125℃保存3min,随后以2℃/min升到180℃保存3min,最终以15℃/min升到230℃保存15min。

质谱仪器在电子器件负电子源(EI)的水解方式下运作,应用问隔为0.2S的全扫捕方式(扫捕范畴m/z40~450),离子源溫度200℃。

判定和定性分析:根据将各成分峰中的物质与NISTl4.L谱库的规范化学物质开展配对,并将获得的质谱分析和保存指数值(RI)与NISTl4.L谱库巾的规范化学物质开展较为。用内标法测算各成分的相应成分,結果表明为3个反复的“美乐”红酒试品的均值±标准偏差。

2 結果剖析

2.1 壳聚糖媒介化学交联标准的提升結果

2.1.1 偶联剂摩尔分数对媒介制作的危害

壳聚糖脂质体媒介悬架醛基的总数与其说固定化工作能力的高低相关。不一样摩尔分数的戊二醛对壳聚糖脂质体媒介上悬架醛基质量浓度的危害见图2。

由图得知,在一定区域内,伴随着戊二醛水溶液摩尔分数的提升,媒介上的悬架醛基质量浓度呈持续上升发展趋势,可是当戊二醛水溶液摩尔分数做到5%时,媒介上悬架醛基质量浓度达2.4%,以后随戊二醛摩尔分数提升,媒介上悬架醛基反倒趋于平稳。应用不一样加酶量,测得数据信息与此一致。結果表明,摩尔分数5%的戊二醛水溶液早已能够 保证非常多数目的醛基与壳聚糖媒介上的羟基产生化学交联反映,这时媒介对酶的固定量做到较大 。因而媒介制取时采用摩尔分数为5%的戊二醛水溶液作偶联剂就可以。

2.1.2 化学交联時间对媒介制作的危害

如图所示3所显示,在2~8h区域内,媒介上的悬架醛基随化学交联時间的提高而提升;当化学交联时问做到8h后,悬架醛基的质量浓度基本上维持不会改变。表明8h的化学交联時间足够使戊二醛水溶液中的醛基与媒介上的羟基充足反映,使媒介对酶的固定量较大 。因而,挑选8h做为壳聚糖脂质体媒介和戊二醛水溶液的化学交联時间。

2.2 固定化酶EC溶解酶的酶学特性

2.2.1 固定化酶EC溶解酶的最好反映溫度以及可靠性如

如图4所显示,根据分散酶和同定化酶在30、36、42、48、54、60、66℃和72℃标准下的酶活結果得知,他们的适宜溫度各自为30℃和42℃。同定化酶在30~42℃酶促反应慢慢提高,适宜溫度比分散酶略高;在42℃之后溶解EC工作能力逐步减少,与酶活呈下降趋势的分散酶转变基本一致;但固定化的酶活在42~72℃均高过分散酶。

发生适宜溫度迁移可能是南于EC溶解酶的空间构造遭受同定化媒介的干扰而略微更改,尤其是在42℃之后,固定化酶EC溶解酶的空间布局比较平稳,催化反应底物工作能力比分散酶略高。也是有别的科学研究结果显示固定化酶脲酶与分散酶的适宜催化反应溫度有一定的差别,但二者的催化剂实际效果并没有明显差别。

可靠性数据显示,同定化EC溶解酶在42℃标准下储放24h后相对性酶活仍能做到60%之上,表明固定化酶EC溶解酶可以承受一定区域的溫度,对自然环境的适应能力不错,在常温自然环境下不用超低温维护,是一种绿色环保型固定化。

2.2.2 固定化酶EC溶解酶的适宜pH以及可靠性

从图5能够 看得出,在pH为3.0、3.3、3.6、3.9、4.2、4.5和4.8的标准下,分散酶和固定化催化反应底物EC的适宜pH有一定的偏移,分散EC溶解酶对pH4.5的EC水溶液具备较大的催化剂的活性,且在pH3.0~4.5酶促反应慢慢提升,相对性酶活在30%~100%之问;同定化EC溶解酶的适宜pH为3.6~3.9,且在这里区域内酶促反应均高过分散酶,特别是在在pH3.6上下主要表现出较大 催化剂的活性。

可靠性数据显示,固定化在适宜pH标准下反应速度越长,相对性酶促反应的降低速率越快,特别是在是12~24h期问的相对性酶活弹性系数远远地高过0~12h的弹性系数。同定化酶在pH3.6标准下置放24h以后的酶活损率不超过40%,表明固定化酶EC溶解酶的耐碱性较分散酶好,更适合繁杂条件的实际操作。以前就会有科学研究将以京尼平为偶联剂与来自普罗维登斯菌(ProvidenciarettgeriJN-B815)的酸碱性脲酶开展化学交联,发觉此化学交联酶可以融入米酒的繁杂微自然环境并除去尿素溶液和EC。
 

申明:文中常用照片、文本来源于《食品与生物技术》,著作权归原作全部。

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